شناسایی گونه های آسپرژیلوس مهم بیماری زا با استفاده از پلی مورفیسم اشکال کانفورماسیونی تک رشته های dna ژن کد کننده rrna

تاریخ دریافت 28/5/87 تاریخ پذیرش 1/7/88   چکیده پیش زمینه و هدف: تست مولکولی sscp [1] روشی بر پایه pcr است که به­عنوان یکی از شیوه­های سریع شناسایی قارچ­ها مورد علاقه قرار گرفته است. این فن در گذشته برای اهدافی غیر از شناسایی میکروارگانیزم­ها، از جمله در آنالیز موتاسیون­ها مورد استفاده قرار گرفته است، بعدها در شناسایی و تفکیک بین گونه­ای برخی اورگانیزم­ها کاربرد پیدا کرد. با توجه به قابلیت روش فوق در تعیین اختلافات بین ترادف­های ژنی از طریق پلی مورفیسم تک رشته­های dna بدست آمده از محصولات pcr ، در این مطالعه سعی شده است که امکان استفاده از این روش که بی­نیاز از هضم با آنزیم­های محدودساز می­باشد در ایجاد افتراق بین گونه­ها بررسی شود.   مواد و روش کار: 205 ایزوله آسپرژیلوسی در این مطالعه از نمونه­های بالینی و محیطی چند بیمارستان آموزشی کشور و نمونه­های بالینی بیماران مراجعه کننده به مرکز قارچ شناسی بدست آمده بودند، مورد بررسی قرار گرفتند. این تعداد با توجه به شیوع یک درصدی عفونت­های آسپرژیلوسی در میان عفونت­های قارچی بیمارستانی انتخاب شدند. تمامی جدایه­های آسپرژیلوسی، در محیط­های کشت افتراقی آسپرژیلوس­ها شامل: cya , cya20s, mea و cza کشت داده شده، با استفاده ازخصوصیات کلنی و جلوه­های میکروسکوپی شناسایی شدند. در روش مولکولی استخراج dna ب ه­ روش دستی گلاس بید و فنل - کلروفرم، آمپلیفیکاسیون قطعه its2 و دناتوراسیون dna برای تولید تک رشته انجام گرفت، سپس با استفاده از [2] g- page و عکس­برداری از باندها الگوهای تفکیکی مقایسه شدند.   یافته­ها: در طول یک مطالعه 18 ماهه، 205 ایزوله آسپرژیلوسی شامل یازده گونه بدست آمد، منابع جداسازی گونه­ها، نمونه­های محیطی و بالینی بیمارستانی بودند. ایزوله­های آسپرژیلوسی 25 درصد از منابع بالینی و 75 درصد از نمونه­های محیطی بیمارستان­ها بدست آمدند. در بررسی sscp که نتیجه آن افتراق بین گونه­های آسپرژیلوس بود. آسپرژیلوس نیدولانس، آسپرژیلوس فیشری، آسپرژیلوس کوادریسینکتا، (آسپرژیلوس فومیگاتوس و آسپرژیلوس نایجر) در یک گروه، (آسپرژیلوس فلاوس، آسپرژیلوس ترئوس، آسپرژیلوس اوکراسئوس) در گروه دیگر از هم قابل تفکیک هستند.   بحث و نتیجه­گیری: sscp به­عنوان یک روش سریع، کم هزینه و آسان می­تواند برای شناسایی مهم­ترین گونه­های آسپرژیلوس بیماریزای انسان مورد استفاده قرار گیرد، هر چند که به­دلیل ویژگی پایین روش احتمالا در کاربرد وسیع آن در آزمایشگاه­های روتین تردید وجود دارد.   کلید واژه­ها: آسپرژیلوس، شناسایی، پلی مورفیسم   مجله پزشکی ارومیه، دوره بیستم، شماره سوم، ص 171-164 ، پاییز 1388   آدرس مکاتبه: ارومیه، پردیس نازلو، دانشکده پزشکی، تلفن: 2770969-0441، همراه: 09124464972 email: [email protected] [1] single stand conformational polymorphism [2] gradient poly acryl amide electrophoresis